如何向国际期刊提交未经裁剪的 Western blot原始图像？

专家意见：The original uncropped images of western blot should be included to prove the results are reliable.

译文：应附上未经裁剪的 Western 印迹原始图像，以证明结果的可靠性。

编辑解读：现在越来越多的国际期刊注重原始数据，重视数据的真实性（可重复）和可靠性，那么应该如何正确提交无裁剪的原始WB图片呢？可以考虑从如下几方面着手。

- 图表中的图像不应过度覆盖感兴趣的条带。图板应在条带上方和下方包含一些背景区域。原始图像中的任何非特定条带都应包含在图中，并在文本或图例中加以说明。

- 进行条带间比较分析时，应在同一凝胶/印迹上跑所有相关样本。

- 每张图都应包括所有相关的对照，如有必要，对照样本应与实验样本在同一印迹或凝胶上跑胶。

- 图片不应包括来自不同印迹、曝光或凝胶的条带合成图像。如果需要用来自多个印迹或凝胶图像的数据来说明结果，则不应将不同图像拼接在一起；应将它们明确区分为图中的单独板块，并在图例中注明它们代表不同的凝胶、印迹或曝光。

- 如果在绘制图表时对单个印迹/凝胶图像中的泳道进行了重新排列，则应在图表上用垂直黑线清楚标明图像拼接处，并在图例中注明这些泳道代表不同的凝胶、印迹或曝光。

-强烈不建议对不同凝胶/印迹上的样本进行定量比较；如果不可避免，则必须在图例中说明样本来自同一实验或平行实验，且凝胶/印迹是平行处理的。

-对于凝胶中不相邻的重新排列的泳道，必须以划定泳道之间界限的方式清楚标明。重新排列的泳道应在图例中注明。

-上样对照（如 GAPDH、actin）必须在同一印迹上进行。如果样品处理对照在不同的凝胶上进行，则必须在图例中注明。论文中裁剪过的凝胶必须保留所有重要条带。

-不鼓励使用高对比度凝胶和印迹，因为过度曝光可能会掩盖其他条带。

-WB重复的结果应提交以供审查。重复的次数应在图注中清楚地标明。

提交Western blot原始图片的格式要求：

- 创建一个PDF文件，其中包含稿件主图和补充图中的所有印迹和凝胶原始图像。建议使用图像软件（如 Gimp、Photoshop）编译和注释原始图像，然后以 LZW 压缩方式导出/保存为 tiff 文件。也可以使用 PDF 将多个带注释的 jpeg/tiff 图像文件编辑成一个 PDF 文件。不建议在 Powerpoint 中编辑图像，因为这样会丢失分辨率。

- 文件应命名为 "S1_raw_images"，并作为 "补充信息 "文件上传或存放在合适的公开数据存储库中，并在 "数据可用性声明 "中提供数据集标识符（DOI 或其他形式的持久性标识符）。

- 作者应为每张原始印迹或凝胶图像贴上标签，以清楚地注释加载顺序、实验样本的身份、捕获图像的方法，并说明哪张图板是由该原始图像生成的。原始图像上应包含或标明分子量标记，最终图中未包含的任何泳道应在原始印迹/凝胶图像的泳道标记上方标注 "X"。所有标记和注释均应在不遮盖任何数据或背景条带的情况下进行。

-正文选用的条带来自于原始图片的哪些条带最好用方框标示。

作者在提交稿件时应注意以下几点：（1）检查图片是否重复；（2）检查印迹和凝胶是否拼接了泳道；（3）确保提供的原始图与正文图片相符。

无裁剪的原始WB图片范例如下：

专家意见：Please be sure to provide methodology for all experiments (for example, for western blots, describing lysis, SDS-PAGE, membrane transfer, blocking, primary/secondary antibody incubation conditions, blot detection, software used for analysis, etc.)

译文：请务必提供所有实验的方法（如 Western 印迹、裂解、SDS-PAGE、膜转移、阻断、一/二抗孵育条件、印迹检测、分析所用软件等）。

编辑解读：方法的可重复性是验证研究真实性的重要依据，因此方法的可重复描述至关重要。

专家意见：Mouse brain tissues were lysed with 100 μL/50 mL protein lysate RIPA. Please check:  should this be 100 μL/ 50 mg?

译文：用 100 μL/50 mL 蛋白裂解液 RIPA 对小鼠脑组织进行裂解。请检查：是否应为 100 μL/50 mg？

编辑解读：作者在描述方法重要细节时，需要仔细审查是否正确。比如NRR要求作者在描述Western blot所涉及的一抗和二抗时，需要提供抗体的RRID，此时需要确保所提供的RRID与文中的Cat#及生产商与RRID官方网站一致。如果研究中所用的抗体在RRID官方网站中确不能检索到，那么不需提供该抗体的RRID，而不应提供错误的RRID。