超敏ECL化学发光检测试剂盒
超敏ECL化学发光检测试剂盒
产品编号:B500022 ¥380 / B500023 ¥700
包装规格:A液(发光剂),25mL / 50mL B液(稳定剂),25mL / 50mL
产品简介:
本公司研发的超敏ECL化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的底物检测试剂盒。本产品能够在HRP的催化下发生化学反应而发光,可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子,由于使用了两种新的增强剂混合协同增强发光,其高灵敏度能够检测pg级别的抗原,发光信号强烈持久,可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。
保存条件:
4oC避光保存,一年有效。如果长期不用,可以-20oC保存,
注意事项:
- 为获得最佳实验结果,请务必优化实验条件,包括检测样品的用量、一抗、二抗稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择。
- 务必使用推荐的抗体稀释浓度以获得阳性结果,最佳抗原和抗体用量须通过预实验来确定。
- 由于奶粉中含有内源性生物素,在使用亲和素/生物素系统时,封闭液中应避免使用奶粉。
- 由于叠氮钠是HRP抑制剂,在缓冲液中应避免使用叠氮钠作为防腐剂。
- 在与膜发生接触过程中,请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材,避免蛋白污染及高背景。
- A液和B液在吸取过程中必须要更换枪头,A液和B液相互污染后会导致A液或B液逐渐失效,影响后续的使用效果。A液与B液混合后须尽快使用,放置过久会影响灵敏度。
- 各溶液使用后,请盖紧瓶盖避光保存,以防失效。特别是B液,含有氧化剂,比较容易被还原而失效。
- A液和B液均对人体有害,操作时请注意适当防护。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
- Western二抗孵育后,印迹膜经过数次充分洗涤后,用平头镊将膜取出,用吸水纸略吸去过多的液体(切勿接触膜的蛋白质),然后置于一洁净器皿内或是保鲜膜上。
- 根据印迹膜大小,将A液与B液等体积混合,配制为发光检测底物工作液(使用量约为每10cm2膜1mL或者根据个人实验习惯使用)。滴加发光底物工作液到印迹膜上,确保工作液均匀覆盖在膜上,放置1-5分钟。
- 取膜,弃发光底物工作液,用吸水纸略吸去过多的液体,将膜放置于两片洁净保鲜膜中间,此过程应小心完成,避免膜与膜之间产生气泡。随后进行压片检测或是荧光成像仪检测。
- 压片检测:将膜固定于片夹内,暗室内压片1分钟,立即显影定影,根据结果再调整压片时间。或直接分别压片几秒或者几分钟,然后一起显影定影观察结果。
- 荧光成像仪检测:将膜放置到荧光成像仪内,参照仪器说明书进行检测。
问题解答:
问题 |
可能原因 |
解决方法 |
高背景(背景高或无特异性蛋白带) |
一抗的稀释没有使用正确的缓冲液和正确的浓度 |
使用推荐的封闭液和TBS/T稀释抗体并4℃孵育过夜。 |
化学发光检测时没有使用相应的膜 |
使用高质量的NC膜或PVDF膜 |
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膜封闭不足导致一抗或二抗产生大量的非特异性结合 |
用含5%脱脂奶粉的TBS/T在室温封闭1-2小时 |
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二抗的稀释没有使用正确的缓冲液和正确的浓度,或二抗的特异性差 |
一些二抗会与蛋白产生非特异性的结合。因此在检测中可加入一步二抗的对照试验,在没有一抗的情况下,直接加入二抗孵育。也可将二抗用含5%脱脂奶粉的TBS/T在室温下孵育1小时 |
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配制试剂的用水水质不佳 |
在配制试剂时(尤其是磷酸化抗体)使用Milli-Q或其它超纯的去离子水 |
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信号弱(检测不到信号) |
一抗孵育不足 |
适当延长孵育时间(4℃孵育过夜) |
转膜不完全 |
转膜时采用更高的电压和更长的时间。也可采用预染的蛋白Marker监控转膜的过程 |
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封闭膜超时 |
缩短封闭膜的时间 |
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蛋白的表达水平低于检测底限 |
在每孔中加入更多的蛋白;先采用免疫沉淀法富集蛋白;换用表达高的样本或细胞;检测前适当刺激蛋白的表达 |
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二抗与一抗的结合率太低 |
提高二抗的浓度或换用与一抗匹配的二抗 |
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配制试剂时发生交叉污染 |
重新配制各种试剂 |
Origin: Proteintech Biotechnology, Inc of USA
Distributor: Pioneer Biotechnolgy,Inc
Contact: Tel 029-88237772 or 13484545009 Fax 029-88237772
E-mail : xfyangbio@163.com
Internet: www.xfbio.com