既用型BCA蛋白定量试剂盒（无需在使用时稀释标准品）

既用型BCA蛋白定量试剂盒

试剂盒组成、储存、稳定性：

产品介绍：

BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知，二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子（biuret reaction），一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。本试剂盒含有一系列浓度的蛋白质标准品溶液(BSA溶液)，即取即用，无需稀释，方便快捷。

5. 产品特点：
5. 方 便 快 捷——提供即用型标准品，省去繁琐的稀释步骤；
5. 准 确 性 高——变异系数远小于考马斯亮蓝染色法；
5. 线性范围宽——灵敏，检测范围：20~2,000 μg/mL；
5. 兼 容 性 好——与金属离子、还原剂、螯合剂及去污剂兼容性较好
5. 注意事项

1. 蛋白标准请在全部溶解后使用，如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，Solution A和Solution B混合成工作液时可能会有浑浊，但充分振荡混匀后就会消失，成为淡绿色的透明溶液。
2. 需酶标仪一台，测定波长为540-590nm之间，562nm最佳；需96孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整A液，B液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
3. BCA蛋白定量试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保无EGTA， EDTA低于10mM，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM。不适用BCA法时建议使用Bradford法蛋白定量试剂盒。还可以考虑用超纯水稀释，透析/除盐，ACETONE/TCA沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用温箱加热，但是切勿过热。如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford法蛋白定量试剂盒
4. 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
5. 配制工作液：

A: 计算工作液总量: 工作液总量 = (BSA标准品样本个数＋待测样本个数)×复孔数×每个样本显色工作液体积

举例：BSA标准品样本个数为 8个，待测样本个数 3个，复孔数 2个

显色工作液总量 = (8个BSA标准品样本＋3个待测样本)×2个复孔×200 μL(每个样本工作液体积)=4400ul

B: 根据计算出的所需显色工作液用量，将试剂A和试剂B按照50:1的体积比，配制显色工作液，充分混匀。

注意：1）由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1~2个孔的量；

2）新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24 h。

2. 定量检测

1.取200ul工作显色液加到 96孔板中；

2.分别取即用型BSA标准品①~⑧ 各20μL加到 96孔板中与工作液混匀( BSA标准品 使用前须充分溶解摇匀)；

3.用1×PBS 或 0.9%生理盐水将样品适当稀释(可以多作几个梯度，如2倍、4倍、8倍稀释)，加 20 μL到 96 孔板的样品孔中与工作液混匀（浓度较低的样品也可以直接使用原液）；

4.盖上96孔板盖或者封口膜，37℃孵育30 min，室温冷却5min即可进行检测；

注意：也可以室温放置2h，BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果蛋白浓度较低，可在较高温度孵育，或延长孵育时间。

5.用酶标仪测定每个样品及BSA标准品的A562，或540~590 nm之间的其它波长的吸光度，注意要减去空白对照( 标准品① ＋工作液)的吸光度；

6.绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。

Origin:  Pioneer Biotechnology,  Inc of China

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